Your browser is no longer supported. Update it to get the best YouTube experience and our latest features. Learn more
Các bạn sắp tới sẽ hoặc đang làm việc với virus DNA như HBV, CMV. HPV, BKV, EBV...? Các bạn đang sử dụng kit tách chiết của 1 hãng nào đó [Qiagen, Roche, Thermo...]? Các bạn đang gặp vấn đề tách chiết mẫu khó thậm chí đã sử dụng kit của Qiagen? Dưới đây là một số kinh nghiệm chia sẻ để tiến hành công việc thuận lợi.
Để tách chiết Viral DNA các hãng có các kit tách chuyên biệt cho virus. Qiagen có kit cho tách viral DNA, RNA đồng thời QIAamp Minelute Virus Kit.
Theo kinh nghiệm thực tế thì việc tách bằng kit chuyên biệt của Qiagen tuy hiệu quả nhưng chi phí sẽ tăng cao, nếu sử dụng kit tách virus chuyên biệt của một số hãng chưa có thương hiệu, it được tham khảo tuy rẻ nhưng chất lượng thì cần kiểm chứng qua thời gian.
Trong khi đó kit tách QIAamp DNA Blood Mini Kit và QIAamp DNA Mini Kit tách chiết viral DNA rất hiệu quả. Tuy nhiên sử dụng kit này cần có một số lưu ý rất quan trọng mà người sử dụng không để ý hoặc thường bỏ qua dẫn đến giảm độ nhạy của quy trình. Dưới đây là quy trình tách viral DNA hiệu quả.
1. Quy trình tách Viral DNA thường sử dụng
Thông thường mọi người thường sử dụng nguyên quy trình Blood or Body Fluid trong hướng dẫn sử dụng [2] để tách viral tự do hoặc viral nội bào. Quy trình gồm các bước như sau:
B1. Bổ sung 20 uL Protease [hoặc proteinase K] vào mỗi ống epp 1.5 mL
B2. Bổ sung 200 uL mẫu [máu tổng số, huyết thanh, dịch chiết, buffy coat…] vào ống ở bước [1] và vortex
B3. Bổ sung 200 uL Buffer AL. Vortex 15s [Lưu ý không cho Protease/Proteinase K trực tiếp vào AL]
B4. Ủ 56oC/10 phút, lắc đều dung dịch trong quá trình ủ. Spin down cho dung dịch lắng hết xuống đáy, không dính trên nắp
B5. Bổ sung 200 uL EtOH 100% vào mẫu. Invert 15s. Spin down
B6. Lên cột. Ly tâm 8000 rpm/phút trong 1 phút. Loại dịch chảy qua cột, chuyển cột sang 1 ống thu mới [được cấp bởi kit]
B7. Cho 500 uL Buffer AW1. Ly tâm 8000 rpm/phút trong 1 phút. Loại dịch chảy qua cột, thay ống thu [được cấp bởi kit]
B8. Cho 500 uL Buffer AW2. Ly tâm 14000 rpm/ phút trong 3 phút
B9. Chuyển cột ly tâm sang ống thu mới. Ly tâm khan tốc độ tối đa [14,000 rpm] trong 1 phút
B10. Chuyển cột sang ống 1.5ml sạch. thêm 50 - 200 uL Buffer AE. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút. Ly tâm 8000 rpm/phút trong 2 phút.
Các bước [3], [5], [10] là các bước cần chú ý và được hãng khuyến cáo với một số thay đổi [thể hiện trong handbook].
2. Quy trình tách viral DNA khuyến cáo
- Sử dụng quy trình Blood or Body Fluid ở trên với một số thay đổi sau:
- Luôn sử dụng carrier RNA [5-10 ug/200 ul AL] trong Bước 1 quy trình để tăng tối đa hiệu quả gắn DNA của virus lên cột. Việc sử dụng Carrier RNA rất quan trọng đặc biệt với các mẫu nồng độ virus nhỏ hơn 10000 copies/ml. Khi bổ sung Carrier RNA cần tuân thủ đúng hướng dẫn của hãng để đạt hiệu quả.
- Bước 5, tăng thể tích EtOH từ 200 lên 230 uL để việc gắn DNA lên cột được tối ưu.
- Nếu sử dụng Internal Control DNA [IC] để kiểm tra quá trình tách chiết DNA và sự hiện diện của chất ức chế thì cần lưu ý chiều dài của IC phải lớn hơn hoặc bằng 200bp. Vì kit tách QIAamp DNA Blood Mini Kit và DNA Mini Kit chỉ có thể tách được sản phẩm từ 200bp - 40kb. Đặc biệt IC không được cho trực tiếp vào mẫu mà phải bổ sung sau khi add AL.
- Nếu cần thiết có thể cô đặc mẫu bằng màng lọc Amicon® Centricon-100 [Millipore, 2 ml], Microsep 100 [Filtron, 3.5 ml], and UltraFree® CL [Millipore, 2 ml] hoặc các hãng khác tương đương.
- Tại bước Elution có thể elute 60 ul, tuy nhiên để đạt hiệu quả tốt đa thì nên elute 2 lần mỗi lần 50 ul với đệm AE của bộ kit. Lưu ý nhỏ dung dịch vào giữa màng để màng được thấm đều, nếu không sẽ không thu được sản phẩm.
3. Một số thông tin cơ bản về kit QIAamp DNA Blood Mini Kit và DNA Mini Kit
Thông tin chi tiết về kit QIAamp DNA Blood Mini Kit và QIAamp DNA Mini Kit tham khảo ở bài viết //chienbio.blogspot.com/2015/07/lua-chon-kit-tach-chiet-dnarna-hang.html
Để có thêm chi tiết vui lòng liên hệ với nhà phân phối của Qiagen tại Việt Nam
Tài liệu tham khảo:
1. //www.qiagen.com/vn/shop/sample-technologies/dna-sample-technologies/genomic-dna/qiaamp-dna-blood-mini-kit/#technicalspecification
2. QIAamp® DNA Mini and Blood Mini Handbook 3nd Edittion, Qiagen GmbH
Nguồn: Blog Chienbio
Chương trình Business Class là chương trình khuyến mãi dành cho tất cả tư vấn viên. Khi đạt tiêu chuẩn của chương trình, bạn sẽ được giảm 40%, 60% [tùy theo chương trình tháng đó] giá của bất cứ sản phẩm nào bạn thích trong cuốn catalogue kế tiếp. Cứ vài tháng sẽ có một chương trình Business Class đặc biệt dành cho bạn, giá trị của chương trình này sẽ thay đổi thường xuyên. Để đạt tiêu chuẩn của chương trình, bạn chỉ cần đặt đơn hàng cá nhân có trị giá trên 150 BP mỗi tháng, chương trình không áp dụng cho sản phẩm Wellness Để đạt tiêu chuẩn BC 40% số điểm cần đạt là trên 150bp, tiêu chuẩn BC 60% số điểm cần đạt là trên 200bp Ví dụ: tháng hiện tại là tháng 5/2014 bạn bán được > hoặc = 150 BP. Tháng 6/2014 bạn chọn sản phẩm trong hình Trường hợp 1: Bạn chọn sản phẩm số 3 mã số 23381 giá 499.000đ không giảm giá trong tháng 6, cách tính giá BC [Business Class] của sản phẩm này như sau:
Tính giá BC = [499.000 / 1,3] x 0,6 = 230.000đ
Vậy nếu bạn bán sản phẩm này cho khách với giá 449.000đ, bình thường bạn sẽ lời được 499.000 – 384.000 =115.000đ [Tính giá gốc = 499.000 / 1,3 = 384.000đ]
Nhưng với giá mua BC bạn sẽ lời được 499.000 – 230.000 = 269.000đTrường hợp 2: Bạn chọn mua sản phẩm số 4 mã số 23770 giá không giảm 579.000đ giá đang khuyến mãi trong tháng 6 là 499.000đ, cách tính BC của sản phẩm này như sau:
Tính giá BC = [579.000 / 1,3] x 0,6 = 267.000đ
Vậy nếu bạn bán sản phẩm này cho khách với giá 449.000đ, bình thường bạn sẽ lời được 499.000 – 384.000 = 115.000đ [Tính giá gốc = 499.000 / 1,3 = 384.000đ]
Nhưng với giá mua BC bạn sẽ lời được 499.000 – 267.000 = 232.000đ
Đến đây bạn sẽ thấy nên chọn mua BC sản phẩm nào hợp lý và tiền lời cao hơn, vì bạn chỉ được mua 1 món mỗi tháng.
Bước đầu tiên tham gia chương trình này là trở thành tư vấn viên Oriflame MIỄN PHÍ tại đây THAM GIA NGAY
Đặt mua Bơm chân không Kangaroo KG 200BP [200W]
Bơm chân không Kangaroo KG 200BP [200W] 1,000,000₫
Bạn vui lòng nhập đúng số điện thoại để chúng tôi sẽ gọi xác nhận đơn hàng trước khi giao hàng. Xin cảm ơn!
Oriflame Cosmetics S.A [Stella Ivy Cosmetic] là một tập đoàn mỹ phẩm chuyên kinh doanh các dòng sản phẩm như: nước hoa, dưỡng da, chăm sóc cá nhân, phụ kiện và thực phẩm chức năng bổ sung dinh dưỡng do hai anh em Jonas af Jochnick và Robert af Jochnick thành lập vào năm 1967 … Đọc tiếp
Để lại bình luận